2种微生物制剂防治效果比较试验设计方法研究

总结，以期对培养学生的创新能力提供帮助。

关键词 试验设计；苏云金杆菌；球孢白僵菌；生物防治

中图分类号 S476+.9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）02-0143-02

在“大众创业，万众创新”的时代背景下，高等学校尤其需要重视在校大学生创新能力的培养，对理工科学生而言，开展试验研究是提升自身创新能力的重要途径。滨州学院作为一所地方综合院校，以应用型人才培养为主要目的，学校开设设施农业、园艺技术等专业，笔者长期承担相关专业的植物保护学课程的讲授任务，害虫防治是植物保护学的重要内容。笔者根据长期教学经验和地方特点设计了2种微生物制剂防治效果比较的综合性试验，通过试验教学的实施，对学生创新能力的培养发挥了重要作用，有利于提高人才培养质量。

1 试验设计原则

1.1 立足专业

园艺技术和设施农业专业的大学生将来走上专业相关工作岗位，遇到蔬菜或作物的病虫害防治工作是必然的，在开展病虫害防治工作时需树立绿色环保的理念。生物防治技术绿色环保、可持续控制效果好，是当前病虫害防治中优先考虑的途径。因此，本试验设计主要与害虫生物防治相关，苏云金杆菌和白僵菌是2种在生产中应用非常广泛的微生物制剂，本试验结合专业特点比较2种微生物制剂的防治效果，让学生对最常见的这2种微生物制剂有直观了解，将来在工作中可以选择使用。

1.2 结合地方特色

微生物制剂防治对象的选取应为地方危害较为严重的害虫，滨州学院地处黄河三角洲腹地的滨州市，韭菜是当地人民喜食的传统蔬菜，韭蛆是危害韭菜的重要害虫，故选其作为防治对象。韭蛆是韭菜迟眼蕈蚊（Bradysia odoriphaga Yang et Zhang）幼虫的俗称，隶属双翅目眼蕈蚊科。韭蛆取食范围较广，可为害百合科、菊科、葫芦科、伞形科等7科30多种蔬菜，其中北方保护地的韭菜受害最重，其次为大蒜、洋葱等葱蒜类蔬菜。由于韭蛆地下危害、营隐蔽生活及抗药性等原因，常规杀虫剂对其防治效果不理想，导致防治比较困难。生产中菜农大量使用剧毒、高毒农药，造成韭菜的农药残留严重超标和土壤环境污染，对韭菜食用安全构成巨大威胁。利用微生物制剂开展韭蛆的生物防治试验并比较防治效果，对大学生解决地方实际问题和动手实践能力的培养具有重要作用[1-2]。

2 材料与方法

2.1 试验材料

韭蛆采自山东省滨州市黄河滩区赵四勿村韭菜种植基地，挑选健康且大小一致的3龄幼虫用于生测。苏云金杆菌为山东富先达农药有限公司生产（8 000 IU/mg，可湿性粉剂），球孢白僵菌菌种为生物工程学院实验室提供。

2.2 苏云金杆菌生测方法

用蒸馏水将苏云金杆菌稀释成5个不同浓度，稀释倍数分别为500倍、1 000倍、2 000倍、4 000倍和8 000倍。依据药液浓度的不同设5个处理，每个处理3次重复，每次重复20头试虫，同时设清水对照一组。

用药液将滤纸浸润后铺在9 cm培养皿内，将韭菜剪成2 cm小段，于不同浓度药液中浸泡1 min，取6段浸泡后的韭菜茎段放入培养皿内，然后用毛笔轻轻地移入试虫。试验过程中保持培养皿内滤纸湿润，根据取食情况每天及时补充浸过相应浓度药液的韭菜茎。

将培养皿置于（24±1）℃光照培养箱下培养，4、8、24、48 h后检查结果，以毛笔轻触虫体，幼虫不动计为死亡。记录死虫数，最后计算死亡率[3]。

2.3 球孢白僵菌生测方法

2.3.1 球孢白僵菌孢子悬浊液母液的制备。将球孢白僵菌菌种接种于白僵菌产孢培养基（蛋白胨10 g，麦芽汁40 g，酵母膏2 g，琼脂粉20 g，加蒸馏水至1 000 ml，在121 ℃下高压灭菌30 min），25 ℃培养，球孢白僵菌大量产生孢子后，将培养皿密封放入4 ℃冰箱内保存备用[4]。

取250 mL的烧杯1个，先加入蒸馏水100 mL，再加入吐温-80 200 μL，刮取球孢白僵菌孢子粉溶入蒸馏水中，配成白僵菌孢子悬浊液母液，镜检检测孢子浓度为2×109个/mL。

2.3.2 生测方法。将球孢白僵菌母液用水稀释成5个不同孢子浓度，分别为2×109个/mL、1×109个/mL、0.5×109个/mL、0.2×109个/mL、0.1×109个/mL，处理后于1、2、4、6 d检查结果。

依据球孢白僵菌母液稀释倍数设5个处理，处理及对照設置试虫的饲喂方法、试验结果统计方法同2.2苏云金杆菌的生测方法。

3 结果与分析

3.1 苏云金杆菌的室内防治效果

不同稀释倍数苏云金杆菌处理不同时间对韭蛆的室内防治效果见表1。可以看出，苏云金杆菌可在较短时间内大量杀死韭蛆，致死率高，速效性强，是防治韭蛆较好的生物试剂。苏云金杆菌稀释倍数越低对韭蛆的致死率越高，死亡数量越多，致死时间越短，稀释500倍4 h后韭蛆死亡率可达96.67%；稀释1 000倍8 h后韭蛆死亡率可达91.67%；稀释2 000倍24 h后死亡率达100%。处理时间越短，不同稀释倍数处理间幼虫死亡数量差异越大，处理4 h稀释500倍韭蛆接近全部死亡，稀释4 000倍和8 000倍则零死亡；随处理时间的延长，各不同稀释倍数处理韭蛆死亡数量的差异逐步缩小，处理24 h后差异明显缩小，处理48 h后接近一致，韭蛆全部死亡和接近全部死亡。

根据不同稀释倍数和不同处理时间的差异性分析，可知苏云金杆菌处理4 h后，稀释500倍韭蛆的平均死亡率明显高于其他4个处理（在5%水平上差异显著），表明苏云金杆菌在稀释500倍时速效性好；处理8 h后，稀释500倍和1 000倍处理韭蛆的平均死亡率明显高于稀释2 000倍、4 000倍和8 000倍的3个处理（在5%水平上差异显著），稀释2 000倍处理韭蛆平均死亡率明显高于稀释4 000倍和8 000倍（在5%水平上差异显著）。因此，苏云金杆菌稀释2 000倍防治韭蛆具有较好的经济性和高效性。

3.2 球孢白僵菌对韭蛆的防治效果

不同孢子浓度球孢白僵菌处理不同时间对韭蛆的室内防治效果见表2。可以看出，球孢白僵菌孢子浓度越高、处理时间越长，防治效果越好。处理6 d后，孢子浓度为2×109个/mL的球孢白僵菌防治效果最好，韭蛆平均死亡率为28.33%，较其他4个孢子浓度处理防治效果差异显著；0.1×109个/mL孢子浓度处理韭蛆死亡率最低，为1.67%，0.2×109个/mL孢子浓度处理韭蛆死亡率为6.67%，二者差异不显著，表明这2个浓度处理对韭蛆基本无防治效果。

球孢白僵菌对韭蛆的致死时间较长，5个孢子浓度处理1 d后均无韭蛆死亡，处理2 d后2×109个/mL、1×109个/mL孢子浓度处理也仅是少量死亡，韭蛆死亡率分别为3.33%和1.67%。随处理时间的加长，不同孢子浓度处理韭蛆死亡数量逐步增加，前期增长缓慢，后期增速加快，处理4 d后不同处理的死亡数量快速增长，6 d 后不同处理均有一定数量韭蛆死亡，且死亡数量明显增多。

3.3 苏云金杆菌和球孢白僵菌对韭蛆防治效果比较

通过比较苏云金杆菌和球孢白僵菌对韭蛆的防治效果，可知苏云金杆菌对韭蛆的防治效果明显高于球孢白僵菌。另外，苏云金杆菌速效性强，球孢白僵菌速效性差，药效生效慢。

综合分析可得出如下结论：苏云金杆菌2 000倍液田间应用具有较好的前景，而2×109个/mL孢子浓度球孢白僵菌则无田间应用前景。

4 实施效果分析

本试验是一个综合性试验，需要学生全面掌握细菌、真菌等微生物特性、微生物制剂的使用方法，还需掌握害虫韭蛆的生物学习性、苏云金杆菌和球孢白僵菌的生测方法以及防治效果的比较和统计等知识，是对学生所学专业知识的一次全面检验，对培养学生综合考虑问题、解决实际问题能力的培养有重要作用，可全面提高学生的综合素质和创新创业能力[5-6]。

5 参考文献

[1] 梅增霞，吴青君，张友军，等.韭菜迟眼蕈蚊的生物学、生态学及其防治[J].昆虫知识，2003，40（5）：396-398.

[2] 冯惠琴，郑方强.韭蛆發生规律及防治研究[J].山东农业大学学报，1987，18（1）：71-81.

[3] 尹怀富，王秀峰.韭蛆的发生及防治研究进展[J].中国植保导刊，2005（8）：11-13.

[4] 赵楠，周仙红，庄乾营，等.韭蛆无公害防治技术研究进展[J].山东农业科学，2014，46（12）：124-128.

[5] 黄卫，胡飞俊，邓树华，等.三种微生物制剂对锯盗成虫的防治效果研究[J].粮油食品科技，2013，21（6）：108-110.

[6] 微生物制剂对棉铃虫红铃虫防治效果试验[J].华农科技，1976，（1）：50-53.

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